SAMD8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416890-ACT

SAMD8 (domínio motivo alfa estéril contendo 8) é uma proteína de membrana associada ao retículo endoplasmático implicada no metabolismo de esfingolipídios, particularmente na regulação da interconversão entre ceramida e esfingomielina na homeostase de lipídios de membrana. Por meio de seu papel previsto no controle de reservas de esfingolipídios bioativos, a SAMD8 pode influenciar a função do RE, a composição de membranas e processos de sinalização a jusante ligados a respostas ao estresse e decisões de destino celular. Um equilíbrio alterado de esfingolipídios é uma característica recorrente na biologia de doenças metabólicas, inflamatórias e neurodegenerativas, bem como em fenótipos associados ao câncer, tornando a SAMD8 um nó útil para estudos mecanísticos de vias. A modulação da expressão de SAMD8 ajuda a investigar como o remodelamento lipídico do RE se integra à sinalização celular e à homeostase de organelas em sistemas de células humanas.

SAMD8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SAMD8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAMD8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SAMD8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SAMD8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAMD8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SAMD8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAMD8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAMD8 em células tumorais com expressão de SAMD8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.