Sam 68 Plasmide Double Nickase (h): sc-401378-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sam 68 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sam 68 Double Nickase Plasmid (h) e il Sam 68 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KHDRBS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sam 68 Antibody (H-4): sc-514468
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sam 68 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401378-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sam 68 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401378-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KHDRBS1 codifica Sam68, una proteina legante l’RNA della famiglia STAR che collega la trasduzione del segnale al metabolismo dell’RNA regolando lo splicing alternativo, l’esportazione dell’mRNA, la stabilità e la traduzione. Sam68 agisce nel nucleo e nel citoplasma ed è modulata dalla fosforilazione a valle di vie quali le chinasi della famiglia Src e la MAPK, mettendo in relazione la segnalazione dei fattori di crescita con la selezione delle isoforme trascrittomiche. Attraverso il controllo di programmi di processamento dell’RNA, KHDRBS1 influenza la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e la dinamica del citoscheletro, risultando spesso implicato in fenotipi proliferativi e invasivi in modelli legati al cancro. Un’attività deregolata di Sam68 è stata inoltre associata ad alterazioni del processamento neuronale dell’RNA e dell’espressione genica responsiva allo stress, a supporto della sua rilevanza negli studi sullo splicing tessuto-specifico e sulle reti di regolazione dell’RNA.
Sam 68 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KHDRBS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KHDRBS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KHDRBS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KHDRBS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.