Sam 68 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401378-ACT

KHDRBS1 codifica a Sam 68 (Src-associated in mitosis 68 kDa), uma proteína ligante de RNA da família STAR que acopla a transdução de sinal ao metabolismo de RNA. Sam 68 regula o splicing alternativo, a exportação de mRNA, a estabilidade e a tradução por meio da ligação a elementos ricos em U/A, e é controlada dinamicamente por fosforilação e outras modificações pós-traducionais. Participa de vias associadas à progressão do ciclo celular, às respostas a danos no DNA e à remodelação do citoesqueleto, integrando sinais de quinases da família Src e da via MAPK. A atividade desregulada de Sam 68 tem sido associada a programas de splicing alterados e a padrões aberrantes de expressão gênica observados em múltiplos modelos relevantes para câncer e neurodegeneração, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre processamento de RNA.

Sam 68 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KHDRBS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sam 68 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KHDRBS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KHDRBS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sam 68. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KHDRBS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sam 68 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sam 68 em células tumorais com expressão de KHDRBS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.