SAC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404467-ACT

ヒトSACM1LはSAC1をコードしており、SAC1は小胞体（ER）およびゴルジ体に関連するホスホイノシチドホスファターゼとして、ホスファチジルイノシトール-4-リン酸（PI4P）を加水分解し、オルガネラの脂質組成を維持します。PI4Pプールを制御することで、SAC1は膜輸送、ゴルジ体の構造維持、ならびにER–ゴルジ接触部位における脂質交換を調節し、分泌経路のフラックスと細胞恒常性に影響を及ぼします。SAC1依存的なホスホイノシチドシグナルは、初期分泌ネットワークにおける小胞出芽、カーゴ選別、ストレス適応を司るより広範な経路とも連関しています。SACM1L活性の破綻やPI4Pバランスの異常は、膜ダイナミクスやシグナル状態の変化と関連し、増殖性疾患や神経発達疾患の病態生物学に関わる可能性が示されています。

SAC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SACM1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SACM1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSACM1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSACM1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSACM1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。