Plásmido CRISPR de Activación (h) S-100A5: sc-418401-ACT

S100A5 codifica S-100A5, una proteína de unión a Ca2+ de la familia S100 que actúa como un sensor intracelular dinámico, conectando los flujos de calcio con cambios en las interacciones proteicas y en el estado celular. Al igual que otras proteínas S100, S-100A5 puede influir en la señalización y en la organización del citoesqueleto al modular proteínas diana de manera dependiente del calcio, integrando señales que afectan la diferenciación celular y las respuestas al estrés. La expresión de S100A5 está enriquecida en tejidos neurales y se ha utilizado como marcador de estados de linaje neuronal y glial, respaldando estudios de programas del neurodesarrollo y de la transcripción dependiente de la actividad. La desregulación de la señalización de la familia S100 se investiga con frecuencia en la biología de la inflamación y del cáncer, lo que convierte a S100A5 en un nodo útil para explorar redes reguladoras vinculadas al calcio en contextos relevantes para la enfermedad.

S-100A5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100A5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

S-100A5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100A5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de S-100A5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100A5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de S-100A5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía S-100A5 en células tumorales con expresión de S100A5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.