S-100 α chain Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402065-ACT

S100A1 codifica a cadeia α da proteína S-100, uma proteína EF-hand ligante de cálcio que atua como mediadora de sinalização, conectando a dinâmica intracelular de Ca2+ a redes de interações proteína–proteína. Em células humanas, S100A1 participa da regulação da organização do citoesqueleto, da motilidade celular e de vias de sinalização responsivas ao estresse, influenciando processos como miogênese, função mitocondrial e acoplamento excitação–contração por meio de vias dependentes de cálcio. Alterações na expressão de S100A1 foram relatadas em múltiplos contextos patológicos, incluindo disfunção cardiovascular, remodelamento neuromuscular e cânceres, nos quais pode afetar programas de proliferação, invasão e diferenciação. Como um marcador molecular de estados de sinalização dependentes de cálcio, S100A1 é frequentemente estudada em mapeamento de vias e em modelos mecanísticos de homeostase tecido-específica e de remodelamento associado a doenças.

S-100 α chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

S-100 α chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de S-100 α chain. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de S-100 α chain no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via S-100 α chain em células tumorais com expressão de S100A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.