RyR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402986

Visão geral

O RYR2 codifica o receptor de rianodina 2 (RyR-2), um canal tetramérico intracelular de liberação de Ca²⁺ localizado no retículo sarcoplasmático/endoplasmático, que medeia o acoplamento excitação–contração ao gerar a liberação de cálcio induzida por cálcio. A atividade do RyR-2 coordena transientes de Ca²⁺ que regulam a contração dos cardiomiócitos, o metabolismo mitocondrial e vias de sinalização dependentes de Ca²⁺, incluindo respostas transcricionais ligadas à CaMKII e à calcineurina/NFAT. A função do canal é moldada pela montagem de complexos macromoleculares, por modificações pós-traducionais e pela detecção de Ca²⁺ luminal, integrando estímulos adrenérgicos à homeostase intracelular de Ca²⁺. Perturbações genéticas e funcionais de RYR2 estão associadas a síndromes hereditárias de arritmia e a fenótipos relacionados a cardiomiopatias, tornando-o um nó central para o estudo do manejo de cálcio cardíaco e da sinalização responsiva ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RYR2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RYR2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RYR2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RYR2 para a investigação da sinalização de RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RYR2 críticos para a função RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RYR2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RYR2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RYR2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RYR2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.