RUFY4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405000-ACT

RUFY4 (RUN and FYVE domain containing 4) codifica uma proteína adaptadora citosólica implicada em eventos de tráfego de membranas que acoplam a sinalização de pequenas GTPases à dinâmica endossomal. Por meio de seu domínio RUN e de características relacionadas ao FYVE com ligação a lipídios, o RUFY4 está associado ao transporte vesicular, à organização endossomo–lisossomo e ao controle espacial do roteamento de receptores e cargas, o que pode influenciar os desfechos da sinalização imune inata. Padrões de expressão e associações com vias sugerem papéis na biologia de células mieloides e do sistema imune, incluindo processos que moldam a inflamação e o processamento/apresentação de antígenos. Redes desreguladas de tráfego e sinalização imune envolvendo RUFY4 são relevantes para estudos de biologia de infecções, distúrbios inflamatórios e interações tumor–imunidade, nas quais a regulação endossomal pode afetar a ativação de vias a jusante.

RUFY4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RUFY4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RUFY4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RUFY4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RUFY4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RUFY4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RUFY4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RUFY4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RUFY4 em células tumorais com expressão de RUFY4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.