RTP1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-433714-LAC

O gene Rtp1 de camundongo codifica a proteína transportadora de receptores 1 (RTP1), um pequeno fator acessório associado à membrana que promove o tráfego e a expressão funcional na superfície celular de receptores específicos acoplados à proteína G (GPCRs), especialmente receptores olfatórios. A RTP1 auxilia na maturação dos GPCRs, na exportação a partir do retículo endoplasmático (RE) e na localização na membrana plasmática, influenciando assim a transdução de sinal dependente de receptores e a biologia dos GPCRs sensoriais. Ao modular a disponibilidade de receptores na superfície celular, a RTP1 pode moldar a dinâmica de sinalização a jusante ligada ao cAMP e a responsividade celular a ligantes. A desregulação do tráfego de receptores e da sinalização de GPCRs é relevante para estudos de neurobiologia e de sistemas sensoriais, e a RTP1 é frequentemente usada como gene-ferramenta em fluxos de trabalho de expressão heteróloga de GPCRs e desorfanização.

As Partículas de Ativação Lentivirais RTP1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Rtp1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais RTP1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Rtp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de RTP1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Rtp1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.