RPTPα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422515
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RPTPα O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RPTPα, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RPTPα Anticorpo (H-4): sc-398203
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RPTPα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422515 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Ptpra de camundongo codifica a fosfatase de tirosina proteica do tipo receptor alfa (RPTPα), uma fosfatase transmembrana que modula a sinalização ao desfosforilar resíduos de tirosina inibitórios em quinases da família Src e em substratos relacionados. Por meio dessa atividade, influencia a adesão mediada por integrinas, a dinâmica das adesões focais, a remodelação do citoesqueleto e a sinalização downstream de MAPK/ERK, que em conjunto moldam programas de proliferação, migração e diferenciação. A RPTPα também participa de interações (crosstalk) com receptores tirosina-quinase e pode ajustar limiares de sinalização em contextos neuronais e relacionados ao sistema imune. A desregulação da sinalização de Ptpra tem sido associada a processos relevantes para transformação oncogênica e comportamento invasivo, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos do equilíbrio quinase/fosfatase em vias associadas a doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RPTPα (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ptpra em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ptpra, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ptpra na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RPTPα.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ptpra para a investigação da sinalização de RPTPα, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ptpra críticos para a função RPTPα
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ptpra para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RPTPα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo RPTPα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ptpra. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RPTPα Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR RPTPα (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ptpra para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ptpra definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.