RPA135 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402818
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RPA135 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RPA135, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RPA135 Anticorpo (4H6): sc-293272
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RPA135 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402818 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
POLR1B codifica a RPA135, a segunda maior subunidade catalítica da RNA polimerase I, que conduz a síntese de pré-rRNA 47S no nucléolo. A RPA135 é central para a biogênese de ribossomos e integra a sinalização de fatores de crescimento e o estado nutricional à transcrição de rDNA, relacionando-a à organização nucleolar, à progressão do ciclo celular e à proteostase. A perturbação da transcrição pela Pol I ativa vias de estresse nucleolar que convergem em checkpoints dependentes de p53 e podem remodelar programas globais de tradução. A produção desregulada de rRNA e a biogênese ribossômica alterada são características recorrentes de estados proliferativos e de adaptação ao estresse, tornando o POLR1B um nó útil para estudar o controle transcricional do rDNA e a função nucleolar.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RPA135 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POLR1B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POLR1B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POLR1B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RPA135.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POLR1B para a investigação da sinalização de RPA135, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POLR1B críticos para a função RPA135
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POLR1B para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RPA135 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RPA135 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POLR1B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RPA135 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RPA135 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POLR1B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POLR1B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.