RoXaN CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411701-ACT

ZC3H7B は、細胞質に局在する RNA 結合タンパク質 RoXaN をコードしており、poly(A) 結合タンパク質やメッセンジャーリボ核タンパク質（mRNP）複合体の構成要素との相互作用を介して、転写後の遺伝子発現制御に関与するとされています。RoXaN は mRNA の安定性や翻訳の制御に関連付けられており、細胞ストレス応答や増殖関連プログラムに関わる遺伝子群の協調的な発現を支える可能性があります。ウイルス因子との相互作用も報告されていることから、感染時の宿主―病原体インターフェースにおける生物学や、RNA 代謝の制御に関与する役割が示唆されます。RNA 結合タンパク質の異常や mRNA プロセシング経路の破綻は、がん生物学や神経・免疫系の表現型と広く関連するため、ZC3H7B は遺伝子発現制御の機構研究に有用な標的となります。

RoXaN CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZC3H7Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RoXaN CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZC3H7B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZC3H7B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RoXaNの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZC3H7B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRoXaN依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZC3H7B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRoXaN経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。