ROS-GC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404483-NIC

ヒトのGUCY2Dは、網膜外節グアニル酸シクラーゼ1（ROS-GC1）をコードしており、これはGTPをcGMPに変換して視細胞における環状ヌクレオチドシグナル伝達を維持する膜結合型酵素である。ROS-GC1は光受容（フォトトランスダクション）の下流で機能し、グアニル酸シクラーゼ活性化タンパク質を介したCa²⁺依存的フィードバックを統合することでcGMP量を回復させ、cGMP依存性（ゲート型）チャネルの活性を調節する。この経路は、光によって引き起こされる細胞内Ca²⁺変化を環状ヌクレオチドの代謝回転（ターンオーバー）に結び付けることで、外節の恒常性とシナプスシグナル伝達を支える。GUCY2Dの遺伝学的異常は遺伝性網膜変性の表現型と強く関連しており、本遺伝子はcGMP代謝、感覚シグナル伝達の忠実性、ならびに視細胞の生存機構を研究するうえで重要な結節点となっている。

ROS-GC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GUCY2D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GUCY2D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GUCY2Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GUCY2Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。