ROR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401324-ACT

ROR2 codifica o receptor órfão tipo quinase de tirosina 2 (receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2), uma proteína transmembrana de passagem única que atua principalmente como um correceptor não canônico de WNT, com forte acoplamento à sinalização de WNT5A. O ROR2 regula a remodelação do citoesqueleto, a polaridade planar celular, a migração celular e a padronização do desenvolvimento por meio de vias que se cruzam com as GTPases da família Rho, a sinalização por JNK e programas transcricionais independentes de β-catenina. Na biologia humana, alterações na expressão ou na sinalização de ROR2 estão associadas a morfogênese aberrante e motilidade celular desregulada, o que o torna relevante para estudos de desenvolvimento esquelético, organização tecidual e fenótipos celulares invasivos. Assim, o ROR2 é amplamente utilizado como ponto de entrada mecanístico para dissecar a arquitetura da via WNT não canônica e a sinalização de receptores dependente do contexto.

ROR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ROR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ROR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ROR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ROR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ROR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ROR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ROR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ROR2 em células tumorais com expressão de ROR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.