ROR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401841-ACT

ヒトROR1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1）は、RORファミリーに属する単回膜貫通型受容体であり、非カノニカルWntシグナル伝達、とりわけ細胞骨格ダイナミクス、極性、指向性移動を制御するWNT5A駆動経路に関与するとされています。ROR1は状況依存的に働くシグナル伝達の足場（スキャフォールド）として機能し、Rho GTPアーゼやMAPK関連プログラムなどの下流ノードを調節することで、細胞の生存や運動性に影響を及ぼします。成人組織におけるROR1発現は一般に低い一方、複数の悪性腫瘍で発現上昇が報告されており、浸潤性の表現型や分化状態の変化と関連します。これらの特性により、ROR1は発生シグナルの再活性化、上皮—間葉可塑性、ならびに腫瘍細胞のシグナル依存性を研究するうえで有用な標的となります。

ROR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ROR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ROR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ROR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はROR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ROR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のROR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるROR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびROR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるROR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。