RORβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432582

概要

Rorbは核内受容体であるRORβ（retinoic acid receptor-related orphan receptor beta）をコードしており、ROR応答配列に結合して細胞種特異的な遺伝子発現プログラムを制御する、リガンド調節性の転写因子です。マウスではRORβは中枢神経系と網膜で高発現しており、神経分化、層構造のパターニング、概日リズムに連動した転写リズム、ならびに光受容体関連遺伝子ネットワークに寄与します。ROR/REV-ERB軸の一員として、神経細胞のアイデンティティやシナプス機能を形作る発生・代謝関連の転写経路とも交差します。RORβ依存的な制御の変化は神経発達および感覚に関わる表現型と関連づけられており、神経回路形成や網膜生物学の研究における利用を支持しています。

RORβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRorb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rorb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rorbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RORβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RORβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rorb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RORβの機能に不可欠なRorbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rorbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RORβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRORβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rorb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RORβ HDRプラスミド（m）および RORβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRorbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRorb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。