RORβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402834-ACT

RORB codifica o recetor nuclear RORβ, um fator de transcrição de ligação ao ADN que regula programas génicos envolvidos na diferenciação neuronal, na saída do ritmo circadiano e no desenvolvimento do sistema sensorial. Como membro da rede ROR/REV-ERB, o RORβ interage com o controlo transcricional de vias metabólicas e de desenvolvimento, moldando a identidade e a excitabilidade específicas de cada tipo celular. A expressão de RORB é enriquecida no sistema nervoso central, incluindo populações da retina e do córtex, onde contribui para a formação de circuitos neurais e para a regulação de genes relacionados com fotorrecetores. A desregulação de programas transcricionais associados a RORB tem sido ligada, em contextos de investigação, a mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricas.

RORβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RORB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RORβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RORB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RORB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RORβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RORB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RORβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RORβ em células tumorais com expressão de RORB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.