Rock-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400367

Visão geral

ROCK1 codifica a proteína quinase 1 contendo domínio coiled-coil associada a Rho (Rock-1), uma quinase de serina/treonina que atua como principal efetora de RhoA para regular a contratilidade actomiosínica e a remodelação do citoesqueleto. A Rock-1 fosforila substratos-chave que controlam a formação de fibras de estresse, a dinâmica de adesões focais e a atividade da cadeia leve da miosina, conectando a sinalização Rho/ROCK à forma celular, motilidade, adesão e citocinese. Por meio desses processos, a ROCK1 contribui para a mecanotransdução e a arquitetura tecidual, e sua desregulação tem sido associada a alterações no comportamento invasivo e a respostas vasculares e fibróticas anormais na biologia das doenças. A ROCK1 também está implicada em contextos de apoptose e sinalização inflamatória, tornando-se um ponto relevante para dissecar o crosstalk entre vias em diversos modelos celulares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rock-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ROCK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ROCK1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ROCK1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rock-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ROCK1 para a investigação da sinalização de Rock-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ROCK1 críticos para a função Rock-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ROCK1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rock-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rock-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ROCK1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rock-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rock-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ROCK1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ROCK1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.