RNF4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422689-ACT

O gene Rnf4 de camundongo codifica a RNF4, uma ligase E3 de ubiquitina direcionada por SUMO, que reconhece substratos poli-SUMOilados por meio de motivos de interação com SUMO e promove sua ubiquitinação e degradação pelo proteassoma. A RNF4 ajuda a acoplar a sinalização por SUMO ao controle de qualidade proteica dependente de ubiquitina, influenciando respostas a dano no DNA, estresse de replicação e regulação transcricional por meio da modulação de fatores nucleares-chave. Ao controlar a estabilidade de proteínas modificadas por SUMO, a RNF4 contribui para a manutenção da integridade do genoma e para a progressão do ciclo celular, processos frequentemente perturbados na transformação oncogênica. Assim, a perturbação de Rnf4 é utilizada para estudar a interação entre as vias SUMO–ubiquitina, a proteostase nuclear e redes de sinalização adaptativas ao estresse em células de mamíferos.

RNF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Rnf4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RNF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Rnf4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Rnf4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RNF4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Rnf4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RNF4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RNF4 em células tumorais com expressão de Rnf4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.