RNF185 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416413

Visão geral

RNF185 codifica uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING localizada na membrana externa mitocondrial, que contribui para o controlo de qualidade proteica ao catalisar a transferência de ubiquitina para substratos selecionados. Através de degradação e sinalização dependentes de ubiquitina, a RNF185 tem sido associada à regulação da homeostase mitocondrial, a processos relacionados com a mitofagia e ao diálogo entre a função mitocondrial e a sinalização imunitária inata. Interações reportadas com vias de autofagia e inflamação sustentam a sua relevância para o estudo de respostas ao stress que ligam o dano de organelos a programas transcricionais a jusante. Alterações na atividade da RNF185 têm sido investigadas em contextos em que a disfunção mitocondrial e a desregulação da proteostase estão implicadas, incluindo neuroinflamação e remodelação metabólica associada ao cancro.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RNF185 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RNF185 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RNF185, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RNF185 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RNF185.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RNF185 para a investigação da sinalização de RNF185, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RNF185 críticos para a função RNF185
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RNF185 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RNF185 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RNF185 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RNF185. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RNF185 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RNF185 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RNF185 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RNF185 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.