RNase 8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-414187-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RNase 8 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- RNase 8ダブルニカースプラスミド（h）およびRNase 8ダブルニカースプラスミド（h2）は、RNASE8を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RNase 8 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-414187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNase 8 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-414187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNASE8はRNase 8をコードしており、RNase 8は分泌型のRNase Aスーパーファミリーに属する分子で、細胞外RNA代謝および粘膜表面における自然免疫防御に寄与します。カチオン性リボヌクレアーゼとして、RNase 8は抗菌活性、炎症シグナル伝達の調節、さらにRNA依存的な宿主—微生物相互作用を介した上皮バリア恒常性の制御に関与すると考えられています。RNASEファミリーのリボヌクレアーゼの発現異常は、サイトカイン環境の変化や組織炎症と関連づけられており、RNASE8は上皮免疫・感染生物学・炎症性疾患の機序を結び付ける経路を解明するうえで有用な標的となります。RNASE8に関する研究はまた、分泌型RNaseが細胞外トランスクリプトームや局所組織環境における免疫細胞のリクルートにどのような影響を与えるかを理解する手がかりにもなります。
RNase 8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RNASE8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RNASE8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RNASE8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RNASE8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。