RMI2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407104

Visão geral

RMI2 (instabilidade genômica mediada por RecQ 2) codifica um componente conservado do dissolvassoma BLM–TOP3A–RMI1/2, que promove a dissolução de junções de Holliday duplas para suprimir trocas entre cromátides-irmãs e manter a estabilidade do genoma. Ao coordenar o processamento de intermediários de recombinação homóloga, o RMI2 favorece a reinicialização fiel das forquilhas de replicação e limita eventos aberrantes de crossing-over durante o reparo do DNA. Essa atividade vincula o RMI2 a vias centrais de resposta a danos no DNA e ao controle de checkpoints do ciclo celular sob estresse replicativo. A disrupção da função do dissolvassoma, incluindo alterações na atividade de RMI2, está associada ao aumento da instabilidade cromossômica e a fenótipos observados em defeitos de manutenção do genoma relacionados à síndrome de Bloom, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos que contribuem para processos mutacionais associados ao câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RMI2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RMI2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RMI2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RMI2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RMI2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RMI2 para a investigação da sinalização de RMI2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RMI2 críticos para a função RMI2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RMI2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RMI2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RMI2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RMI2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RMI2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RMI2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RMI2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RMI2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.