RIP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400377-ACT

ヒトRIPK1（RIP）は、TNF受容体およびパターン認識受容体シグナル伝達の中枢的な制御因子として働くセリン／スレオニンキナーゼをコードしており、炎症性転写、アポトーシス、あるいはネクロプトーシスのいずれに向かうかを決定するシグナルを統合します。RIPK1は足場（スキャフォールド）機能と触媒機能を介して受容体近傍複合体の組み立てを統括し、NF-κBおよびMAPKシグナル伝達に加えて、RIPK3–MLKLによるネクロプトーシス実行機構とも交差します。その活性はサイトカイン産生、細胞ストレス応答、自然免疫の恒常性に影響を及ぼすため、炎症や免疫調節異常における重要な研究対象（ハブ）として頻繁に解析されています。RIPK1シグナルの制御異常は、慢性炎症性疾患、神経炎症、腫瘍関連シグナル伝達などの状況で関与が示唆されており、細胞死および炎症経路の機構研究を後押ししています。

RIP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RIPK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RIP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RIPK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRIPK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RIPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRIPK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRIP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRIPK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRIP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。