Ribosomal Protein S3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402327-ACT

RPS3 codifica a proteína ribossômica S3, um componente conservado da pequena subunidade ribossômica 40S, necessária para a iniciação e o alongamento precisos da tradução, sustentando assim a síntese proteica global e o controle do crescimento celular. Além de seu papel ribossômico, a RPS3 tem sido implicada na regulação de respostas ao estresse e na estabilidade do genoma, incluindo interações com vias ligadas ao dano oxidativo e ao reparo de DNA. Alterações na biogênese de ribossomos e no controle translacional podem contribuir para a transformação oncogênica e mudanças no destino celular, tornando a RPS3 um alvo útil para estudar proteostase, programas de proliferação e sinalização adaptativa ao estresse. A desregulação de proteínas ribossômicas e da vigilância associada ao ribossomo tem sido associada a ribossomopatias e fenótipos relacionados ao câncer, apoiando pesquisas mecanísticas sobre como a perturbação de RPS3 remodela a saída do transcriptoma para o proteoma.

Ribosomal Protein S3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPS3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein S3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPS3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPS3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein S3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPS3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein S3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein S3 em células tumorais com expressão de RPS3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.