Ribosomal Protein S16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403364-ACT

RPS16 codifica a proteína ribossômica humana S16, um componente conservado da subunidade pequena 40S do ribossomo, necessária para a decodificação precisa do mRNA e para uma iniciação de tradução eficiente. Como parte da biogênese ribossômica e da síntese proteica no citoplasma, o RPS16 sustenta programas de crescimento celular e vias de proteostase que acoplam a sinalização de nutrientes ao output translacional. Perturbações na dosagem e na montagem de proteínas ribossômicas podem desencadear respostas de estresse nucleolar e remodelar redes transcricionais ligadas ao p53, conectando a integridade do ribossomo ao controle do ciclo celular. A expressão aberrante de proteínas ribossômicas, incluindo RPS16, foi relatada em múltiplos contextos de doença e é frequentemente examinada como um marcador de capacidade translacional alterada em estados proliferativos e adaptados ao estresse.

Ribosomal Protein S16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPS16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein S16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPS16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPS16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein S16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPS16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein S16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein S16 em células tumorais com expressão de RPS16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.