Ribosomal Protein L39 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410990-ACT

RPL39 codifica a proteína ribossômica L39, um pequeno componente básico da subunidade ribossômica maior 60S que contribui para a montagem do ribossomo e para interações estáveis entre rRNA e proteínas, necessárias para uma tradução citosólica eficiente. Como parte da maquinaria central de tradução, o RPL39 influencia a proteostase e programas de crescimento celular intimamente acoplados à sinalização de mTOR, às respostas integradas ao estresse e à biogênese de ribossomos. Alterações na expressão de proteínas ribossômicas podem deslocar a capacidade e a fidelidade da tradução, modificando a síntese de reguladores envolvidos no controle do ciclo celular e na adaptação ao estresse. A biogênese ribossômica e a tradução desreguladas são características recorrentes de diversos cânceres e de ribossomopatias hereditárias, tornando o RPL39 um ponto útil para investigar como a saída translacional molda fenótipos relevantes para doenças.

Ribosomal Protein L39 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL39 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein L39 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL39 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL39, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein L39. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL39 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein L39 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein L39 em células tumorais com expressão de RPL39 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.