Ribosomal Protein L28 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405270-ACT

RPL28 codifica a proteína ribossomal L28, um componente essencial da subunidade grande 60S do ribossomo, necessária para o alongamento translacional preciso e para uma biogênese ribossomal eficiente. Como parte da via nucleolar de montagem do ribossomo, RPL28 dá suporte ao processamento de rRNA, à maturação da subunidade grande e à proteostase, ligando sua atividade ao controle do crescimento celular e à reprogramação translacional adaptativa ao estresse. A expressão ou a dosagem alterada de proteínas ribossomais pode perturbar a tradução global e seletiva de mRNAs e ativar a sinalização de estresse nucleolar, processos frequentemente investigados na biologia do câncer e em outros distúrbios que envolvem síntese proteica desregulada. Assim, RPL28 é um ponto de partida útil para estudar a função do ribossomo, redes de controle translacional e efeitos downstream sobre a progressão do ciclo celular e a adaptação metabólica.

Ribosomal Protein L28 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL28 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein L28 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL28 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL28, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein L28. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL28 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein L28 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein L28 em células tumorais com expressão de RPL28 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.