Ribophorin II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402599-ACT

RPN2 codifica a riboforina II, uma subunidade essencial do complexo oligosacariltransferase (OST) no retículo endoplasmático rugoso, que catalisa a glicosilação N‑ligada co‑traducional de polipeptídeos recém-sintetizados. Ao apoiar a maturação de glicoproteínas e o controle de qualidade no RE, a riboforina II influencia vias de dobramento, tráfego e proteostase de proteínas, que se cruzam com a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response, UPR). Alterações na glicosilação dependente de RPN2 têm sido associadas a mudanças na composição de receptores de membrana e na dinâmica do proteoma de superfície celular, tornando-a relevante para estudos de adaptação ao estresse e de sinalização desregulada em modelos de doença. Em sistemas humanos, a perturbação de RPN2 é frequentemente usada para investigar como a capacidade de glicosilação no RE molda a viabilidade celular, a adesão e a responsividade a estímulos de vias de sinalização.

Ribophorin II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribophorin II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribophorin II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribophorin II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribophorin II em células tumorais com expressão de RPN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.