Riboflavin kinase Plasmide Double Nickase (h): sc-418359-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Riboflavin kinase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Riboflavin kinase Double Nickase Plasmid (h) e il Riboflavin kinase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RFK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Riboflavin kinase Antibody (E-7): sc-398830
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Riboflavin kinase Plasmide Double Nickase (h) | sc-418359-NIC | 20 µg | $410.00 |
RFK codifica la riboflavina chinasi, un enzima citosolico che fosforila la riboflavina (vitamina B2) formando flavin mononucleotide (FMN), il primo passaggio impegnante nella biosintesi dei cofattori flavinici. L’FMN viene successivamente convertito in FAD e sostiene un’ampia gamma di reazioni redox dipendenti da flavoproteine, fondamentali per il metabolismo ossidativo mitocondriale, la β‑ossidazione degli acidi grassi e le difese antiossidanti cellulari. Regolando la disponibilità intracellulare di FMN/FAD, RFK contribuisce a collegare lo stato vitaminico all’omeostasi energetica e alla gestione delle specie reattive dell’ossigeno. Alterazioni del metabolismo dei flavini sono state associate a disfunzioni metaboliche e mitocondriali, rendendo RFK un bersaglio utile per studiare la regolazione, dipendente dai nutrienti, delle vie redox e delle risposte allo stress.
Riboflavin kinase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RFK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RFK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RFK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RFK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.