Riboflavin kinase Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-418359-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Riboflavin kinaseO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Riboflavin kinase (h) e o Plasmídeo Double Nickase Riboflavin kinase (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para RFK. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Riboflavin kinase Anticorpo (E-7): sc-398830
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Riboflavin kinase Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-418359-NIC | 20 µg | $410.00 |
RFK codifica a riboflavina quinase, uma enzima citosólica que fosforila a riboflavina (vitamina B2) para formar mononucleótido de flavina (FMN), o primeiro passo comprometido na biossíntese de cofatores flavínicos. O FMN é subsequentemente convertido em FAD e sustenta uma ampla gama de reações redox dependentes de flavoproteínas, centrais para o metabolismo oxidativo mitocondrial, a β-oxidação de ácidos gordos e as defesas antioxidantes celulares. Ao controlar a disponibilidade intracelular de FMN/FAD, a RFK ajuda a ligar o estado vitamínico à homeostase energética e à gestão de espécies reativas de oxigénio. Alterações no metabolismo das flavinas têm sido associadas a disfunção metabólica e mitocondrial, tornando a RFK um alvo útil para estudar a regulação dependente de nutrientes de vias redox e respostas ao stress.
Riboflavin kinase O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RFK em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RFK. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RFK. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RFK interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.