Rheb Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400539-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RhebO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Rheb (h) e o Plasmídeo Double Nickase Rheb (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para RHEB. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rheb Anticorpo (80-R): sc-130398
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rheb Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400539-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rheb Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400539-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RHEB codifica a Rheb, uma pequena GTPase relacionada à Ras que atua como um importante ativador a montante do mTORC1, ao interagir diretamente com o complexo em resposta à sinalização por fatores de crescimento e nutrientes. Ao integrar sinais provenientes do complexo TSC1/TSC2 e do estado energético celular, a Rheb ajuda a regular a síntese proteica, a autofagia, a biogênese lisossomal e o crescimento celular. A desregulação da sinalização RHEB–mTOR tem sido associada a alterações no controle metabólico e à proliferação aberrante em diversos contextos relevantes para doenças, tornando a Rheb um nó central para o estudo de retroalimentação da via e adaptação ao estresse. Em células humanas, a atividade da Rheb influencia programas translacionais e processos anabólicos que podem remodelar fenótipos celulares sob limitação de nutrientes ou estimulação mitogênica.
Rheb O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RHEB em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RHEB. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RHEB. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RHEB interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.