Rheb Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400539-ACT

O gene humano **RHEB** codifica a Rheb, uma pequena GTPase relacionada à família Ras que atua como um ativador upstream essencial do **mTORC1**, integrando sinais de fatores de crescimento e de nutrientes para coordenar a síntese proteica, a supressão da autofagia e o metabolismo celular. A atividade de Rheb é controlada pelo complexo **TSC1–TSC2**, conectando a sinalização **PI3K–AKT** e as respostas ao estresse energético à saída da via mTOR. A desregulação da sinalização **RHEB–mTORC1** está implicada em crescimento celular aberrante e reprogramação metabólica, sendo frequentemente estudada no contexto da biologia do câncer e de transtornos do neurodesenvolvimento. Como regulador proximal do mTORC1, Rheb é amplamente utilizado para investigar o controle translacional, a sinalização lisossomal e a homeostase adaptativa ao estresse.

Rheb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RHEB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rheb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RHEB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RHEB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rheb. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RHEB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rheb no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rheb em células tumorais com expressão de RHEB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.