RGS9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404442-ACT

RGS9 codifica o regulador da sinalização de proteína G 9, uma proteína ativadora de GTPase que acelera o término do sinal a jusante de GPCRs ao promover a hidrólise de GTP na subunidade Gα. Em tecidos neuronais, o RGS9 modula vias de receptores dopaminérgicos e opioides e contribui para o controle temporal da sinalização por segundos mensageiros, incluindo processos dependentes de AMPc e a regulação de canais iônicos. É um componente-chave da recuperação da fototransdução na retina, moldando a cinética da sinalização visual e da adaptação. Alterações na expressão ou na função de RGS9 têm sido associadas a defeitos na sinalização retiniana e à desregulação de circuitos neuromodulatórios relevantes para fenótipos relacionados a movimento e recompensa.

RGS9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RGS9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RGS9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RGS9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RGS9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RGS9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RGS9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RGS9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RGS9 em células tumorais com expressão de RGS9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.