RGS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404874-ACT

RGS1（regulator of G protein signaling 1）はGTPase活性化タンパク質であり、Gαサブユニットの不活化を促進することでGPCR（Gタンパク質共役受容体）駆動性シグナルの終結を加速し、ケモカインおよび炎症性刺激の強度と持続時間を規定します。免疫細胞においてRGS1は、ケモカイン受容体や他のGPCR入力の下流で、セカンドメッセンジャー経路およびMAPKシグナルに収束する経路を調節することにより、遊走、活性化の閾値、サイトカイン関連応答を微調整します。RGS1の発現変動は免疫調節異常や炎症性疾患への感受性と関連づけられており、白血球のトラフィッキングや活性化プログラムを制御する役割と整合します。免疫生物学的意義の高いヒト遺伝子として、RGS1は細胞状態の遷移、組織への浸潤、シグナル伝達ネットワークの再配線といった文脈でしばしば研究されています。

RGS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RGS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RGS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RGS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRGS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RGS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRGS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRGS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRGS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRGS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。