RFX4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406366

Visão geral

RFX4 (regulatory factor X 4) é um fator de transcrição do tipo hélice-alada (winged-helix) da família RFX, que se liga a elementos promotores semelhantes à X-box e ajuda a coordenar programas de expressão gênica específicos de cada tipo celular. Na biologia humana, o RFX4 está fortemente ligado a processos do neurodesenvolvimento, incluindo a regulação de redes transcricionais que influenciam a ciliogênese, o desenvolvimento ventricular e os estados de diferenciação no sistema nervoso central. Alterações na atividade de RFX4 têm sido associadas a perturbações no padrão de organização do cérebro e a fenótipos de neurodesenvolvimento, tornando-o um ponto de entrada útil para estudar circuitos regulatórios dirigidos por fatores de transcrição. Como as proteínas RFX podem interagir com vias que governam a acessibilidade da cromatina e módulos gênicos relacionados a cílios, a perturbação de RFX4 é relevante para estudos mecanísticos do controle de linhagem neuronal e de contextos de sinalização ciliar.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RFX4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RFX4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RFX4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RFX4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RFX4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RFX4 para a investigação da sinalização de RFX4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RFX4 críticos para a função RFX4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RFX4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RFX4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RFX4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RFX4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RFX4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RFX4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RFX4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RFX4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.