RFLAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404618

概要

KLF13は転写因子RFLAT-1をコードしており、RFLAT-1はGCリッチなプロモーター要素に結合して、リンパ球活性化や炎症シグナル伝達を制御する遺伝子発現プログラムを調節するKrüppel様ジンクフィンガータンパク質です。RFLAT-1はケモカインおよびサイトカインの転写調節に関与することが示されており、NF-κB依存的な転写応答などの経路とも連関しながら、免疫細胞の分化や活性化状態の形成に寄与します。KLF13/RFLAT-1活性の制御異常は、免疫介在性の病態や炎症関連遺伝子シグネチャーの変化、ならびに疾患関連の細胞種における異常な増殖・生存に関わる転写ネットワークの文脈で研究されてきました。これらの特性により、KLF13はヒトのモデルシステムにおいて、刺激応答性の転写制御や免疫遺伝子回路を解析するための有用なノードとなります。

RFLAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKLF13遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KLF13内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KLF13のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RFLAT-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RFLAT-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KLF13欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RFLAT-1の機能に不可欠なKLF13エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KLF13ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RFLAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRFLAT-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KLF13遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RFLAT-1 HDRプラスミド（h）および RFLAT-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKLF13ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKLF13標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。