Retinoschisin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403895-ACT

RS1 codifica a retinosquisina, uma proteína de adesão secretada, enriquecida na retina, que se monta em oligômeros ligados por pontes dissulfeto e sustenta a organização estrutural da retina neural. A retinosquisina contribui para a coesão intercelular e a integridade sináptica na rede fotorreceptor–célula bipolar, influenciando processos que mantêm a arquitetura laminar e a homeostase de fluidos. No tecido retiniano, a função de RS1 está intimamente ligada a interações com a matriz extracelular e à estabilidade das junções célula–célula que moldam a transmissão de sinais e a resiliência do tecido. A perturbação da expressão de RS1 ou da montagem da retinosquisina está associada a fenótipos de retinosquise ligada ao X e é amplamente estudada em modelos de degeneração retiniana e disfunção sináptica.

Retinoschisin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Retinoschisin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Retinoschisin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Retinoschisin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Retinoschisin em células tumorais com expressão de RS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.