Ret Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422654-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RetO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Ret (m) e o Plasmídeo Double Nickase Ret (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Ret. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ret Anticorpo (6E4C4): sc-101423
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ret Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-422654-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ret codifica uma tirosina‑quinase de receptor que atua como um centro de sinalização para ligantes da família GDNF por meio de co-receptores GFRα, coordenando programas de desenvolvimento neuronal e renal em camundongos. Após a ativação, RET aciona as vias canônicas MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ para regular a sobrevivência celular, a diferenciação, a migração e a orientação axonal. A atividade de Ret é central para linhagens derivadas da crista neural e para a formação do sistema nervoso entérico, e sua desregulação está associada a defeitos do neurodesenvolvimento e a contextos de sinalização oncogênica. Como nó de via, Ret é amplamente estudado para dissecar a sinalização por fatores de crescimento, a especificação de linhagem e respostas transcricionais dirigidas por receptores.
Ret O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ret em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ret. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ret. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ret interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.