RelB CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422643-ACT

Relbは、非カノニカルNF-κB経路の中核を担う転写因子として機能するNF-κB/Relファミリーの一員であるRelBをコードする。RelBは一般にp52とヘテロ二量体を形成し、免疫細胞分化、抗原提示、リンパ組織形成、ならびにBAFFR、CD40、リンホトキシンβ受容体などの受容体下流における炎症性シグナル伝達を制御する遺伝子プログラムを調節する。マウス系では、RelB活性が樹状細胞の成熟やストローマ細胞と免疫細胞のクロストークに影響し、組織恒常性を協調的に維持するサイトカイン／ケモカインネットワークの形成に関与する。RelB依存的転写の破綻は、異常な免疫活性化や慢性炎症状態に関与するとされており、Relbは経路および転写ネットワークの解析に有用なノードとなる。

RelB CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Relbの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RelB CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Relb 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRelb転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RelBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRelb遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRelB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRelb発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRelB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。