Reg IIIγ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422640-ACT

Reg3g codifica a proteína regeneradora derivada das ilhotas pancreáticas 3 gama (Reg IIIγ), uma lectina do tipo C secretada, enriquecida nos compartimentos do epitélio intestinal e das células de Paneth, que contribui para a defesa da barreira mucosa ao ligar-se ao peptidoglicano bacteriano e ao moldar as interações entre hospedeiro e microbiota. A sua expressão é fortemente induzida por vias de sinalização de citocinas e de deteção microbiana, incluindo a sinalização IL-22/STAT3 e respostas imunitárias inatas dependentes de recetores do tipo Toll, ligando a Reg IIIγ à restituição epitelial e a programas antimicrobianos. Alterações na atividade da família REG3 têm sido associadas a estados inflamatórios em superfícies de barreira, tornando Reg3g um marcador útil e um nó mecanístico para estudar inflamação intestinal, disbiose e respostas ao stress epitelial em modelos murinos.

Reg IIIγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Reg3g sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Reg IIIγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Reg3g em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Reg3g, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Reg IIIγ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Reg3g nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Reg IIIγ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Reg IIIγ em células tumorais com expressão de Reg3g silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.