Reg IIIα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404278-ACT

REG3A codifica a lectina C do tipo secretada Reg IIIα, uma proteína antimicrobiana expressa de forma proeminente por células epiteliais intestinais e pancreáticas, onde contribui para a integridade da barreira mucosa e para a defesa imune inata. A Reg IIIα liga-se ao peptidoglicano bacteriano e ajuda a moldar as interações hospedeiro–microbioma, conectando respostas epiteliais ao estresse à eliminação microbiana. Sua expressão é regulada por vias induzidas por citocinas, como IL-22/STAT3, e é frequentemente induzida durante inflamação e lesão tecidual, apoiando programas de restituição e remodelamento epitelial. A atividade desregulada de REG3A/Reg IIIα tem sido associada à doença inflamatória intestinal, pancreatite e inflamação relacionada ao câncer colorretal, tornando-a um marcador útil e um nó funcional em estudos de imunidade epitelial.

Reg IIIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de REG3A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Reg IIIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus REG3A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição REG3A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Reg IIIα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus REG3A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Reg IIIα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Reg IIIα em células tumorais com expressão de REG3A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.