Reelin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401862-ACT

O RELN humano codifica a reelina, uma grande glicoproteína secretada da matriz extracelular que coordena a migração neuronal, a laminação cortical e a sinaptogênese durante o desenvolvimento cerebral e nos circuitos do cérebro adulto. A reelina sinaliza principalmente por meio dos recetores de lipoproteínas VLDLR e LRP8 (ApoER2) para ativar o adaptador DAB1, modulando as cinases da família Src e a dinâmica citosquelética a jusante, que moldam o crescimento de neuritos e a plasticidade sináptica. As vias dependentes de RELN cruzam-se com a transmissão glutamatérgica, a remodelação das espinhas dendríticas e programas génicos dependentes da atividade que influenciam a conectividade das redes. A expressão ou sinalização desregulada de RELN tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, tornando-o um alvo-chave para estudos mecanísticos da formação de circuitos e da função sináptica.

Reelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RELN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Reelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RELN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RELN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Reelin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RELN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Reelin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Reelin em células tumorais com expressão de RELN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.