RBMY1J Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405629

Panoramica

RBMY1J codifica una proteina legante l’RNA associata al cromosoma Y, appartenente alla famiglia RBMY, caratterizzata da un motivo di riconoscimento dell’RNA e da ruoli nella regolazione post-trascrizionale. Le proteine RBMY sono espresse prevalentemente nella linea germinale maschile e sono implicate nella spermatogenesi attraverso il controllo dello splicing del pre-mRNA, della stabilità dell’mRNA e, potenzialmente, della regolazione della traduzione nelle cellule germinali in sviluppo. Questa attività si interseca con le vie di processamento dell’RNA associate allo spliceosoma e con programmi più ampi di espressione genica necessari per la progressione meiotica e la differenziazione delle cellule germinali. Alterazioni dell’integrità del locus RBMY o della sua espressione sono state associate ad anomalie del cromosoma Y e a fenotipi di infertilità maschile, rendendo RBMY1J rilevante per studi sulla regolazione genica nella linea germinale e sulla biologia riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RBMY1J (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RBMY1J in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RBMY1J insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RBMY1J a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RBMY1J.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RBMY1J per lo studio della segnalazione di RBMY1J, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RBMY1J critici per la funzione di RBMY1J
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RBMY1J per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RBMY1J CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RBMY1J CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RBMY1J. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RBMY1J Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RBMY1J (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RBMY1J per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RBMY1J definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.