Plásmido Doble Nickase (h) RBCK1: sc-402044-NIC

RBCK1 (también conocido como HOIL-1) codifica una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como componente central del complejo de ensamblaje de cadenas lineales de ubiquitina (LUBAC), coordinando eventos de ubiquitinación enlazada a Met1 que modelan la señalización inmunitaria innata y adaptativa. Mediante la regulación de la activación de NF-κB y de las salidas de vías inflamatorias aguas abajo de receptores como TNFR y ciertos receptores de reconocimiento de patrones, RBCK1 influye en la producción de citocinas, la supervivencia celular y las respuestas al estrés. RBCK1 también participa en la proteostasis y en las vías de control de calidad a través de redes de señalización por ubiquitina. La desregulación de la actividad de RBCK1/LUBAC se ha vinculado a fenotipos inmunitarios y autoinflamatorios y se ha estudiado en contextos que incluyen la inmunodeficiencia y la inflamación tisular.

RBCK1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RBCK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RBCK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RBCK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RBCK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.