Raver2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404340-ACT

O gene humano **RAVER2** codifica a proteína Raver2, uma proteína de ligação a RNA que se associa a reguladores da família da proteína de ligação ao trato polipirimidínico (PTBP) para influenciar decisões de splicing de pré-mRNA. Por meio da modulação do uso alternativo de éxons, a Raver2 contribui para programas de remodelação do transcriptoma que moldam a identidade celular, a diferenciação e a expressão gênica adaptativa ao estresse. Redes alteradas de fatores de splicing e as mudanças de isoformas delas decorrentes são características recorrentes de fenótipos neurológicos e do desenvolvimento e também estão implicadas em alterações do processamento de RNA associadas ao câncer. Assim, o **RAVER2** é estudado como um nó em vias regulatórias pós-transcricionais que conectam a ligação ao RNA, a função do spliceossomo e saídas de expressão gênica específicas do contexto.

Raver2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAVER2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Raver2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAVER2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAVER2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Raver2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAVER2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Raver2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Raver2 em células tumorais com expressão de RAVER2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.