Rap 2B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403292-ACT

RAP2B codifica a Rap2B, uma pequena GTPase relacionada à Ras que alterna entre estados ligados a GDP e a GTP para regular a transdução de sinais, o tráfego de membranas e a remodelação do citoesqueleto. A Rap2B participa de vias associadas à adesão mediada por integrinas, à dinâmica de vesículas e a desfechos de sinalização relacionados a MAPK que moldam a migração celular e a capacidade de resposta da célula a estímulos extracelulares. Em contextos hematopoéticos e vasculares, a Rap2B está intimamente associada a processos de ativação e secreção plaquetária, apoiando estudos sobre a biologia da trombose e a sinalização inflamatória. Expressão ou atividade desregulada de RAP2B tem sido relatada em diversos cenários relevantes para doenças, incluindo fenótipos de invasão e metástase associados ao câncer, tornando-o um nó útil para a investigação mecanística de vias.

Rap 2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAP2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rap 2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAP2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAP2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rap 2B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAP2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rap 2B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rap 2B em células tumorais com expressão de RAP2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.