Rap 1A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400572

Descripción general

RAP1A codifica Rap1A, una pequeña GTPasa de la familia Ras que alterna entre los estados unidos a GDP y a GTP para controlar la activación de integrinas de dentro hacia fuera (inside-out), la adhesión celular y la remodelación del citoesqueleto. A través de efectores como RIAM, RapL e intermediarios de señalización de MAPK, Rap1A coordina la dinámica de las adhesiones focales, la polaridad celular y el tráfico de membranas que influyen en la migración y la función de barrera. La actividad de Rap1A integra señales procedentes de vías de GPCR y de receptores tirosina cinasa y contribuye a la regulación de las uniones endoteliales y la adhesión de leucocitos. La desregulación de la señalización de RAP1A se ha vinculado con cambios en el comportamiento proliferativo e invasivo en modelos de cáncer y con fenotipos vasculares e inflamatorios en los que se altera la señalización dependiente de la adhesión.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rap 1A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RAP1A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RAP1A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RAP1A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rap 1A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RAP1A para la investigación de la señalización de Rap 1A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RAP1A críticos para la función de Rap 1A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RAP1A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rap 1A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rap 1A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RAP1A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rap 1A (h) y el plásmido HDR Rap 1A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RAP1A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RAP1A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.