Rap 1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400572

Panoramica

RAP1A codifica per Rap1A, una piccola GTPasi della famiglia Ras che alterna stati legati a GDP e a GTP per controllare l’attivazione “inside-out” delle integrine, l’adesione cellulare e il rimodellamento del citoscheletro. Attraverso effettori come RIAM, RapL e intermedi della segnalazione MAPK, Rap1A coordina la dinamica delle adesioni focali, la polarità cellulare e il traffico di membrana, influenzando migrazione e funzione di barriera. L’attività di Rap1A integra input provenienti dalle vie dei GPCR e dei recettori tirosin-chinasici e contribuisce alla regolazione delle giunzioni endoteliali e dell’adesione dei leucociti. Una segnalazione RAP1A deregolata è stata collegata a comportamenti proliferativi e invasivi alterati in modelli di cancro e a fenotipi vascolari e infiammatori in cui la segnalazione dipendente dall’adesione risulta perturbata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rap 1A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAP1A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAP1A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAP1A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rap 1A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAP1A per lo studio della segnalazione di Rap 1A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RAP1A critici per la funzione di Rap 1A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAP1A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rap 1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rap 1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAP1A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rap 1A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rap 1A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAP1A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAP1A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.