Plasmide Double Nickase (m) RANTES: sc-422845-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) RANTES correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RANTES Double Nickase (m) et le plasmide RANTES Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ccl5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RANTES Antibody (A-4): sc-365826
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) RANTES | sc-422845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) RANTES | sc-422845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Ccl5 code RANTES, une chimiokine qui coordonne le trafic des leucocytes en se liant à CCR1, CCR3 et CCR5 afin de favoriser la chimiotaxie, l’adhérence et l’activation des cellules immunitaires. La signalisation de RANTES s’intègre à des voies dépendantes des GPCR qui régulent le remodelage de l’actine, l’activation des intégrines et les réseaux de cytokines, façonnant des microenvironnements inflammatoires dans les tissus périphériques. Une expression altérée de Ccl5 est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation chronique, de pathologies auto-immunes, d’infections virales et d’interactions tumeur–immunité, où le recrutement des cellules myéloïdes et des lymphocytes T influence les phénotypes de la maladie. En tant que médiateur clé du positionnement des cellules immunitaires, Ccl5 est largement utilisé pour explorer la surveillance immunitaire, l’inflammation tissulaire et le dialogue entre le stroma et le système immunitaire dans des modèles murins.
RANTES Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ccl5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ccl5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ccl5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ccl5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.