RANTES Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401806-NIC

CCL5 codifica a quimiocina RANTES, um ligante secretado que sinaliza principalmente através de CCR1, CCR3 e CCR5 para direcionar a quimiotaxia de células T, monócitos, eosinófilos e células NK para locais de ativação imunitária. A sinalização dos recetores induzida por RANTES ativa vias acopladas à proteína G que modulam o fluxo de cálcio intracelular, as cascatas PI3K/AKT e MAPK, a ativação de integrinas e a remodelação do citoesqueleto, moldando assim o recrutamento de leucócitos e a inflamação tecidular. Na biologia humana, a expressão de CCL5 é rigidamente regulada por programas transcricionais inflamatórios e contribui para o tráfego coordenado de células imunitárias em tecidos linfoides e periféricos. A desregulação da sinalização CCL5/RANTES tem sido associada a condições inflamatórias crónicas, patologia autoimune e infiltração imunitária no microambiente tumoral, tornando-a um alvo frequente em estudos mecanísticos de regulação imunitária.

RANTES O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CCL5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CCL5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CCL5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CCL5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.