RANTES Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401806-ACT

O CCL5 codifica a quimiocina RANTES, um ligante secretado de CCR1, CCR3 e CCR5 que coordena o recrutamento, a adesão e a ativação de leucócitos durante respostas inflamatórias. A sinalização de RANTES aciona cascatas dependentes de GPCR que se cruzam com quimiotaxia, ativação de integrinas, fluxo de cálcio e as vias a jusante de MAPK e PI3K, moldando o tráfego de células imunes nos tecidos. A expressão desregulada de CCL5 está associada a microambientes inflamatórios crônicos e a uma vigilância imune alterada, tornando-o relevante para estudos de autoimunidade, dinâmica imune associada a infecções e interações tumor–sistema imune. Em sistemas humanos, CCL5/RANTES é comumente investigado no contexto da comunicação entre células mieloides e células T, redes de citocinas e crosstalk entre estroma e sistema imune.

RANTES O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCL5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RANTES O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCL5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCL5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RANTES. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCL5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RANTES no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RANTES em células tumorais com expressão de CCL5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.