RAMP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402546-ACT

受容体活性調節タンパク質2（RAMP2）は、単回膜貫通型の補助サブユニットであり、選択的なクラスB GPCR複合体、とりわけカルシトニン受容体様受容体（CLR）において、輸送（トラフィッキング）、リガンド特異性、ならびにシグナル出力を規定します。機能的なアドレノメデュリン受容体の形成を可能にすることで、RAMP2はcAMP駆動性のシグナル伝達プログラムを調節し、内皮の恒常性、血管透過性、リンパ管生物学、血管新生応答に影響を及ぼします。RAMP2依存的なシグナルは、細胞骨格ダイナミクス、酸化窒素（NO）に連関した血管トーン調節、炎症性リモデリングを司る経路とも交差します。RAMP2/CLR–アドレノメデュリン軸の活性異常は、心血管系および血管炎症性の表現型に関与すると示唆されており、内皮機能障害やバリア機能（完全性）の観点からしばしば研究されています。

RAMP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAMP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RAMP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAMP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAMP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RAMP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAMP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRAMP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAMP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRAMP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。